던파 다운로드 속도

photoleaching (frap) 분석 후 형광 회복은 AGS-GR 세포 (0.2 x 106 셀/24mm 페 트리 접시) 2 µ g NR4A2-egfp 및 6 µ l metafectene 프로와의 변이 transfection 후에 24 h를 수행 했다. Gastrin (10nm)가 첨가 되 고, 20 분간 배양 기에 남아 있는 세포 들이 Zeiss lsm 510 메타 라이브를 이용 하 여 63x/1.4 오일 DIC를 사용 하였다. 설정 10 사전 블리치 이미지 50-mW로 아르곤 레이저 100%의 레이저 전력에서 작동 하는 488nm 라인과 표백에 의해 다음을 생성 하도록 구성 했다. 0.7 µm의 광 스 플 라이스를 가진 단 하나 z 단면도의 형광 심상은 사용 되었다. 관심 영역 (투자 수익) 표백에 사용 되는 2.5 µm 반경 동그라미 했다. 우리는 200 반복의 속도를 사용 하 고 표 백제 시간은 7.2 초 했다. 이후 이미징 사전 블리치 속도 80 초까지 계속 도달 했다. 형광 복구 시그마 플롯 (표 S2)를 사용 하 여 계산 했다. confocal 영상은 노르웨이 과학 기술 대학, 세포 및 분자 이미징 코어 시설에서 수행 되었습니다.

Gastrin은 AGS-GR 세포의 확산, 마이 그 레이 션 및 침공을 촉진 하는 것으로 알려져 있습니다 [55-57]. 따라서, gastrin에 의해 NR4A2의 과도 유도는이 세포의 gastrin 유도 된 이동 그리고 내 습에 있는 역할을 할지도 모른다. NR4A2와 wnt 신호 전달 경로 사이의 putative 크로스 토크 제안 되었습니다 [49], NR4A2 세포질 tranlocation 및 드-베타 catenin 치료 시 전사의 억압 관련 된. 그러나, NR4A2의 일시적인 유도와는 대조적으로, 우리 NR4A2 사 멸을 증가의 지속적인 (즉, ectopic) 표현 및 AGS의 invasveness-GR 세포 지장을 초래할 수 보여줍니다. 이것은 Llopis et 알 [58]에 의해 유방암 연구에서 발견 되는 것에 해당 하는 위 선 암 세포의 사 멸에 미치는 영향에 관한 한 NR4A2의 일부 임계값 효과가 존재 한다는 것을 제안할 수 있습니다. AGS-gr 세포에서 NR4A2의 낮은 표현 수준은 마이 그 레이 션 및 침공 (치료 AGS-gr 세포 NR4A2 단백질, 그림 1b의 낮은 수준을 보여 지원), 높은 또는 지속적인 NR4A2의 수준이 뚜렷한 메커니즘을 통해 세포의 invasoveness을 감소 하면서 또한 사 멸이 포함 됩니다. 우리는 AGS-GR 세포의 증가 사 멸은 cytosol에서 단백질 단백질 상호 작용을 통해 단백질의 NR4A2 중재 변조로 인해 있을 수 있습니다 추측, 및/또는 NR4A2 현지화/협회 미토 콘 드리 아와 유사한 무엇에 대 한 설명 되었습니다 NR4A1 [48]. 흥미롭게도, NR4A1의 cytosol 인신 매매에 대 한 핵 분자 스위치가 그 dislodges bcl-2 BH4 도메인, 자사의 BH3 도메인을 노출 하는 것이 좋습니다,이는 차례로 블록의 활동을 방지 apoptotic Bcl-X (패) [48]. NR4A2는 위 선 암 세포의 상응 하는 메커니즘에 관여 여부를 알 필요가 없습니다. NR4A2의 일시적인 표현이 그러한 기계 장치에 영향을 미치는 것 같지 않지만 함께 찍은 우리는 AGS GR 세포에 (서) NR4A2의 높고 지탱 된 레벨이 부분적으로 세포 사 멸을 증진 함으로써 이동/침입을 줄인다 고 주장 한다. .

xcellligence ® DP 시스템 (로슈 응용 과학, 독일)은 마이그레이션 측정에 사용 되었습니다. 이 시스템은 개별 웰 스 (CIM 플레이트)의 하단 아래 금 전극 어레이를 포함 하는 특화 된 문화 번호판을 활용 합니다. 전극 표면과의 셀룰러 접촉으로 전극 전체의 임피던스가 증가 합니다. 이 임피던스 값은 DP 시스템에 의해 측정 되며, 셀 인덱스의 치수 없는 단위에 보고 됩니다. AGS-GR 세포 (3.5 x 105/well) 6-잘 번호판을 시드 했다. 24 h 후에 세포는 24 h를 위한 sirna로 transfected, 연속적으로 24 h를 위해 굶주린 혈 청 그 때 (4.0 x 104 세포 또는 우물) CIM 격판덮개 16 (roche 적용 되는 과학)에서 re뿌리기 다음 trysinated.

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